激光共聚焦顯微鏡的操作步驟

　　激光共聚焦熒光顯微鏡是一種目前先進(jìn)的分子細(xì)胞生物學(xué)的分析儀器，利用計(jì)算機(jī)，激光及圖像處理技術(shù)獲得生物樣品的三維數(shù)據(jù)。主要是用于觀察活細(xì)胞結(jié)構(gòu)以及特定分子，離子的生物學(xué)變化，定量分析，以及實(shí)時(shí)的定量測(cè)定等。

　　激光共聚焦顯微鏡的操作步驟：

　　1、根據(jù)熒光探針的激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng)，選擇合適的激光，激光功率，光譜濾光片和發(fā)射濾光片。

　　2、確定掃描的方法：點(diǎn)，線，面，3D掃描。

　　3、確定掃描的密度（分辨率）：分辨率越高，掃描的速度就越慢，圖像的信噪比也越好，但可能會(huì)出現(xiàn)光漂白。

　　4、選擇其物鏡的倍數(shù)及電子放大倍率：確定完這個(gè)條件之后，在選擇掃描的范圍，物鏡的透光率與數(shù)值孔徑（NA）的四次方成正比，并且物鏡放大倍數(shù)的平方。所以，反比例，應(yīng)該盡量選擇具有高數(shù)值孔徑的物鏡。

　　5、根據(jù)樣品的制備質(zhì)量，選擇合適的針孔尺寸，調(diào)節(jié)激光管電壓，光電倍增管功率，降噪等，達(dá)到最佳狀態(tài)。這些參數(shù)的選擇或者設(shè)置十分緊密，都要全面考慮。

　　6、確定光線的切割范圍，也就是掃描樣品的厚度，起始位置以及結(jié)束位置。

　　7、給出了由光切割的層數(shù)和拍攝時(shí)的累積平均次數(shù)。

　　8、獲取圖像并保存。

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